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AN-CN-17 DLS動(dòng)態(tài)光散射和SPOS技術(shù)的應(yīng)用

  更新時(shí)間:2016-09-01 點(diǎn)擊量:3194

摘要:  

 

   磷脂脂質(zhì)體是由磷脂制成的球形顆粒,用于制藥和化妝品工業(yè)。脂質(zhì)體的大小和表面電荷是兩項(xiàng)重要特征需要檢測(cè)和監(jiān)控。動(dòng)態(tài)光散射(DLS)是用于測(cè)量亞微米脂質(zhì)體的大小常見(jiàn)的分析技術(shù),而單顆粒光學(xué)傳感(SPOS)技術(shù)用來(lái)測(cè)量大于1um的脂質(zhì)體,不僅可以檢測(cè)脂質(zhì)體的大小還可以進(jìn)行顆粒計(jì)數(shù)。美國(guó)PSS粒度儀公司的Nicomp 380系列和AccuSizer 780系列在世界各地被用于實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)量的脂質(zhì)體大小和電位(電動(dòng)電勢(shì))。 

 

   脂質(zhì)體是雙分子層的囊泡,通常用于醫(yī)藥領(lǐng)域作為藥物釋放系統(tǒng),將化療藥物運(yùn)送到腫瘤位置。他們由磷脂組成,分子的疏水尾部?jī)A向于聚集在一起,避開(kāi)水相,而親水頭部暴露在水相,形成具有雙分子層結(jié)構(gòu)的的封閉囊泡。在制藥應(yīng)用中活性藥物成分(API)通常是包覆于在脂質(zhì)體到親水的腔內(nèi)或夾在雙分子層之間,這主要取決于API的親水性,如圖1所示。

 

   *個(gè)被批準(zhǔn)用脂質(zhì)體傳遞的藥物是阿霉素脂質(zhì)體,通過(guò)改進(jìn)多柔比星脂質(zhì)體而制得。多柔比星是將藥物包覆于聚已二醇包衣的脂質(zhì)體內(nèi),可以防止免疫系統(tǒng)的排異,增加穩(wěn)定性,處長(zhǎng)半衰期。另外脂質(zhì)體還可以應(yīng)用于生物技術(shù)與美容領(lǐng)域。

 

   脂質(zhì)體可以根據(jù)磷脂層數(shù),粒度,及制備方法進(jìn)行分類。常見(jiàn)的種類有單層小囊泡(SUV),多層小囊泡(SMV),多層囊泡(MLV),單層大囊泡(LUV)和巨大的囊泡(GMV)。脂質(zhì)體的大小跟載藥數(shù)量是影響對(duì)藥物代謝和藥物藥效的重要指標(biāo)。因此對(duì)脂質(zhì)體粒度進(jìn)行快速的檢測(cè)對(duì)藥物遞送至關(guān)重要。

 

   大多數(shù)的脂質(zhì)體是亞微米級(jí)的(20-250nm),的分析方法就是采用動(dòng)態(tài)光散射,例如PSS的Nicmop系列。圖2 所示,一些較大的脂質(zhì)體(GMV)(>5 µm)用動(dòng)態(tài)光散射法分析可能不適合,此時(shí)就可以選用PSS AccuSizer 系列。圖3.

 

制程中的粒徑檢測(cè):

 

   PSS Nicomp 系列和AccuSizer系列都可用于脂質(zhì)體生產(chǎn)過(guò)程中粒徑的測(cè)量,例如微孔濾膜擠出的過(guò)程。圖4-6顯示了,脂質(zhì)體在經(jīng)過(guò)濾孔逐漸減小的濾膜后的粒徑。

 

 

    巨大的囊泡(GMV)脂質(zhì)體制造使用sugar-doped脂膜水化過(guò)程。通過(guò)離心和膜過(guò)濾器超擠壓過(guò)濾來(lái)減小粒子粒徑。脂質(zhì)體粒徑大小的變化是使用AccuSizer單顆粒傳感技術(shù)監(jiān)控,如圖7到10。

陽(yáng)離子包膜脂質(zhì)體:

 

      陽(yáng)離子脂質(zhì)組成的脂質(zhì)體DOTAP (N -[1-(2,3-dioleoyloxy)propyl)-N,N,N-trimethylammonium-methyl-sulfate)已被證明是一種陰離子RNA和DNA核苷酸有效的載體。陽(yáng)離子脂質(zhì)體提供優(yōu)勢(shì),包括高封裝核苷酸和高細(xì)胞吸收效率對(duì)整個(gè)陽(yáng)離子脂質(zhì)靜電電荷影響,防止誘導(dǎo)血清聚合,陽(yáng)離子脂質(zhì)體與聚乙二醇聚合增加使用壽命和允許在腫瘤組織中積累。

 

   陽(yáng)離子脂質(zhì)體于加州大學(xué)戴維斯分校(2)被創(chuàng)造并研究,包含的陽(yáng)離子脂質(zhì)DOTAP封裝微小的RNA。脂質(zhì)體的大小是至關(guān)重要的,因?yàn)檫@些終被注入老鼠靜脈。因此,終的粒徑應(yīng)該不大于100納米左右。陽(yáng)離子包覆脂質(zhì)體大小如圖11所示。

 

 

長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體:

 

   另一個(gè)在加州大學(xué)戴維斯分本校的費(fèi)拉拉實(shí)驗(yàn)室研究的脂質(zhì)體用64Cu標(biāo)記追蹤,通過(guò)正電子斷層掃描(PET),用于改善頭部和頸部腫瘤的可視化。這種脂質(zhì)體是一個(gè)特殊的構(gòu)成,一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)化的HSPC/cholesterol/DSPE-PEG2K組合,創(chuàng)造出一種高穩(wěn)定,脂質(zhì)體,有利于諸多不同的應(yīng)用程序。在這個(gè)配方中HSPC/cholesterol/DSPEPEG2K的摩爾比55.5:39:5.0,然后使用攜帶64Cu 的6-BATPEG 作為放射標(biāo)記。64Cu 脂質(zhì)體會(huì)在各種癌癥中積累,就可以提供一個(gè)敏感追蹤和納米療法生物分布。

 

      64Cu長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的大小如圖12所示。

 

熱敏脂質(zhì)體:

 

   此外,熱敏脂質(zhì)體的研究加強(qiáng)了載體在目標(biāo)處熱導(dǎo)誘發(fā)釋放釋放的能力。在一個(gè)研究pH-sensitive之間復(fù)雜的阿霉素(阿霉素)和銅(CuDox)lysolipid-containing的核心熱敏脂質(zhì)體(LTSLs)成立(4)。這些DPPC脂質(zhì)體是由:DSPE -PEG2k:MPPC(86:4:10摩爾比),DPPC是1,2 -Dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphocholine,DSPE-PEG2k 是1,2 distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-Methoxy polyethyleneglycol-2000、MPPC是1 -palmitoyl-2-hydroxy-sn-glycero-3-phosphocholine。銅TEA茶脂質(zhì)體(葡萄糖酸銅(II)、三乙醇胺(TEA))從non-encapsulated銅中分離了出來(lái)茶在脂質(zhì)體誘導(dǎo)鹽梯度膜。MPPC-Copper茶脂質(zhì)體的大小如圖13所示。

 

   一旦脂質(zhì)體準(zhǔn)備好那么它的粒徑大小就已經(jīng)確定,使用階梯式的茶來(lái)裝治療藥物阿霉素,阿霉素將進(jìn)入脂質(zhì)體作為TEA出來(lái)。

 

Zr-89標(biāo)記的脂質(zhì)體的Zeta電勢(shì)電位:

 

   另一個(gè)關(guān)于Zr-89標(biāo)記脂質(zhì)體被用于評(píng)估長(zhǎng)周期脂質(zhì)體的藥物動(dòng)力學(xué)研究已經(jīng)有段時(shí)間(5)。這些放射性的元素隱藏在親水室內(nèi)腔,在脂質(zhì)體的雙質(zhì)分子層或者表面。在這個(gè)研究里的脂質(zhì)體通過(guò)使用Nicomp系統(tǒng)測(cè)量其粒徑分布曲線,粒徑的范圍是在114-120nm。Nicomp系統(tǒng)同時(shí)用相位分析法原理和沉入式樣品池進(jìn)行Zeta電位的測(cè)量。測(cè)量設(shè)置包括一個(gè)使用一個(gè)12V的電場(chǎng)通過(guò)在電極0.4厘米的一個(gè)缺口。這些多元的測(cè)量結(jié)果如圖14所示。從圖中可以看出,測(cè)量結(jié)果的重復(fù)性是非常好的。

 

 

參考文獻(xiàn):


1. Aoki, N. & Hashimoto, M., Hashimoto Electronic Industry CO. and Yoshimura, T. Liposome Engineering Laboratory, “Measurement of Liposome Size Distribution Using Nicomp 380 and AccuSizer780 AD, presentation, July 2013
2. Thanks to Elizabeth Ingham, Azadeh Kheirolomoom and Jai Seo from the Dr. Katherine Ferrara Lab in the Department of Biomedical Engineering at UC Davis for sharing these data and helping to create this document.
3. Mahakian, L. et.al., Comparison of PET Imaging with 64Cu -Liposomes and 18F-FDG in the 7,12-Dimethylbenz[a] anthracene (DMBA)-Induced Hamster Buccal Pouch Model of Oral Dysplasia and Squamous Cell Carcinoma, Mol. Imaging Biol. (2013)
4. Kheirolomoom, A. et.al., Complete regression of local cancer using temperature-sensitive liposomes combined with ultrasound-mediated hyperthermia, Journal of Controlled Release, 172 (2013).
5. Seo, J. et.al., The pharmacokinetics of Zr-89 labeled liposomes over extended periods in a murine tumor model, Nuclear Medicine and Biology 42 (2015)

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